preventavir
Разместить аптеку

Тест для определения активности аспарагиназы инструкция и описание

  • Международное название: Comb drug
  • Фарм. группа: Другие диагностические средства
  • ATС-код: V04CX
  • Условие продажи: Нет в продаже

ІНСТРУКЦІЯ

для медичного застосування

Тест для визначення активності АСПАРАГІНАЗИ МЕДАК (МААТ)

Кількісний ферментативний тест для визначення активності аспарагін ази.

Каталог № 550.

Тільки для діагностики іп vitro.

Ензим L-Аспарагін аза належить до базових препаратів для лікування гострого лімфобластного лейкозу у дітей та дорослих.

Принцип дії аспарагін ази у ферментативному розщепленні амін окислоти аспарагіну до аспарагінової кислоти та аміаку, що призводить до зниження аспарагіну у плазмі і лікворі (принцип роботи тесту див. нижче).

За допомогою цього тесту можливе вимірювання активності аспарагін ази у процесі лікування, що дозволяє оптимізувати терапевтичне використання аспарагін ази. Моніторинг активностіаспарагін ази проводиться з метою:

• Контролю значення активностіаспарагін ази у сироватці крові в процесі терапії як сурогатного параметра, який характеризує руйнування аспарагіну.

• Визначення спричиненої імунною відповіддю " прихованої" інактивації, яка призводить у результаті до скорочення тривалості ефективної дії аспарагін ази.

• Обгрунтування раціонального рішення про необхідність заміни на альтернативний препарат аспарагін ази абозміни режиму дозування.

МААТ тест medac - гомогенний тест для вимірювання активності аспарагін ази. Робить можливим досягання всіхцілей, пов'язаних з моні торіюванням активності аспарагін ази.

Принцип тесту

аспарагін аза

Субстрат — -» продукт розпаду А + продукт розпадуВ

ферментативний гідроліз

Продукт розпаду В + хромоген — > зелене забарвлення

-> зміна абсорбції при довжині хвилі 700 нм.

Аспарагін аза розщеплює субстрат, аналогічний аспарагіну, на два продукти розщеплення - А і В.

Вивільнений продукт розпаду Вутворює у результаті комплексної реакції з хромогеном забарвлений у зелений колір продукт, що визначає можливість абсорбційного вимірювання.

Оптична щільність вімірюєтьсяна довжині хвилі 700 нм, активність сироваткової аспарагін ази визначається за допомогою стандартної кривої.

Переваги методу

• Кожна мікро лунка може бути розкрита і використана окремо.

• Простота методики, що не потребує відмивання або центрифугування.

• Тривалість виконання тесту -близько 2 годин.

• Висока точність результатів аналізу.

Склад набору

Каталог № 550.

1. Пластина з мікро лунками: 6рядів по 8 лунок у кожному (у рамці, вакуум герметично упакована в алюмінієвий контейнер), легко розкривається, U-подібної форми, спеціально оброблена.

2. Контроль: 2 пробірки - 0,5мл у кожній, аспарагін аза medac Е. Соlі у сироватці людини, ліофілізована.

3. Стандарт: 2 пробірки - 0,5мл у кожній, аспарагін аза medac Е. Соlі у сироватці людини, ліофілізована.

За. Стандарт 1: 600 Од/л Зв. Стандарт 2: 300 Од/л Зс. Стандарт 3: 50 Од/л 3d. Стандарт 4: 0 Од/л

4. Розчинник зразків: 1 флакон- 110 мл, PBS/TWEEN/BSA, pH=7,2-7,4, готовий до використання, містить ProClin™300.

Субстрат: 2 пробірки - 0,75 млу кожній, готовий до використання, містить ProClin™ 300.

5. Хромоген: 2 пробірки - 1 млу кожній, концентрований, Хі, подразливий засіб, R 36/38, S 26, міститьдиметилсульфоксид (EEC № 200-664-3).

6. Розчинник хромогену: 2 пробірки - 2 мл укожній, готовий до використання.

1. Зберігання та стабільність.

Матеріал/реагент

Стан

Зберігання

Стабільність

Тест-набір

Закритий

2...8°С

До терміну зберігання

Мікро пластина

1

Відкрита

2...8°С

у пакунку з

абсорбентом

вологи

До терміну зберігання

Контроль

Відкритий, розчинений

2...8°С

4 тижні

Калібратор

Відкритий, розчинений

2...8°С

4 тижні

Розчинник зразка

Відкритий

2...8°С

8 тижнів

Субстрат

Відкритий

2...8°С

4 тижні

Хромоген

Відкритий

2...8°С

4 тижні

Розчинник хромогену

Відкритий

2...8°С

4 тижні

Після закінчення терміну придатності використання реагентів не допускається.

2. Реагенти та матеріали, що потребуються, але не входять до складу набору.

2.1. Мікро піпетки відповідного об'єму.

2.2 Чисті скляні або пластикові ємності для розчинення зразків і хромогену.

2.3. Фотометр для роботи змікро лунками та фільтром з довжиною хвилі 700 нм.

3. Підготовка реагентів.

Перед початком дослідження всі компоненти набору повинні бути кімнатної температури.

Визначте потрібну кількістьмікро лунок.

3.1. Мікро пластина.

Після вилучення необхідної кількості мікро лунок алюмінієвий контейнер повинен бути щільно упакований. Умови зберігання та стабільність невикористаних мікро лунок наведені у табл. 4.

3.2. Калібратори та контроль.

Розведіть кожний ліофілізованийконтроль і калібратори за допомогою 0,5 мл розчинника зразків. Акуратно переверніть закриту пробірку для повного розчинення всіх частинок, які пристали на корок.

3.3. Розчинення хромогену.

Змішайте хромоген з його розчинником у співвідношенні 1:2.

Кількість лунок

Хромоген, мкл

Розчинник хромогену, мкл

Сума, мкл

Необхідний

об'єм піпетки,

мкл

6

240

480

720

600

7

280

560

840

700

8

320

640

960

800

9

360

720

1080

900

10

400

800

1200

1000

11

440

880

1320

1100

12

480

960

1440

1200

13

520

1040

1560

1300

14

560

1120

1680

1400

15

600

1200

1800

1500

16

640

1280

1920

1600

Зверніть увагу: при змішуванні з розчинником хромоген розігрівається.

Суміш хромогену з розчинником не може і не повинна зберігатися. її необхідно використати відразу ж після приготування.

Не дозволяється змішувати реагенти із різних наборів та інших виробників.

Отримання достовірних і відтворених результатів можливе лише за умови точного виконання методики тесту та використання специфічних реагентів тест-набору.

4. Матеріал для дослідження.

4.1. Тест призначений лише для дослідження зразків сироватки.

4.2. Попередньо не піддавайте сироватку будь-яким впливам для запобігання інактивації. Сироватка не повинна бути контамінована мікро організмами, хілезною або вміщувати еритроцити.

4.3. Сироватку слід розчинити за допомогою розчинника зразків у співвідношенні1:10 (тобто 20 мкл сироватки + 180 мкл розчинника зразків). Проби зі значеннями показників поза межами вимірювання піддають більшому розведенню.

5. А. Методика аналізу

5.1. Надріжте алюмінієвий контейнер для мікро пластини над " блискавкою" та візьміть потрібну кількістьмікрогумок (див. 3.1).

5.2. За допомогою піпетки вмістіть умікро лунки пластини по 20 мкл контролю, калібратора та проби.

5.3. Додайте у кожну мікро лунку 20мкл субстрату.

Піпетування калібраторів, контролів, проб і субстрату повинно бути закінчено за 10 хвилин. Акуратно збовтайте вміст для ретельного перемішування всіх його компонентів. Після цього відразу ж почніть інкубацію мікро пластини.

5.4. Інкубуйте закриті мікро лункипластини протягом 60 хв (±2 хв) при кімнатній температурі (22°С ± 1°С).

5.5. На момент закінчення часу інкубації підготуйте розчин хромогену (див. 3.3).

5.6. В усі мікро лунки пластини додайте 100 мкл розчину хромогену.

5.7. Інкубуйте закриті мікро лункипластини протягом 60 хв (±2 хв) при кімнатній температурі (22°С ± 1°С).

Рівномірно перемішайте всі компоненти шляхом обережного струшування.

Слідкуйте за тим, щоб перед фотометричним аналізом у лунках не було бульбашок повітря.

Фотометричний аналіз слід виконувати відразу після закінчення останнього етапу інкубації.

5. В. Таблиця проведення аналізу.

Калібратори

Контроль

Зразки

Калібратори

20 мкл

-------

-----

Контроль

------

20 мкл

------

Зразки

-------

20 мкл

Субстрат

20 мкл

20 мкл

20 мкл

Інкубація 60 хв при кімнатній температурі (22°С ± 1°С).

Розчин хромогену

100 мкл

100 мкл

100 мкл

Інкубація 60 хв при кімнатній температурі (22°С ± 1 °С).

Фотометричний аналіз на довжині хвилі 700 нм

6. А. Підрахунок результатів (достовірність).

• Прочитайте показники оптичної щільності при довжині хвилі 700 нм. Вимірювання оптичної щільності blank проводьте проти повітря.

• Обов'язкові показники активності контролю надруковані на етикетці пробірки. Критерії достовірності

• Активність контролю повинна знаходитися у межах величин, які вказані ,, (див. етикетку на пробірці).

• Показник оптичної щільностікалібратора 1 повинен бути > 1,500.

• Показник оптичної щільностікалібратора 4 повинен бути < 0,150.

Аналіз слід повторити, якщо результати не відповідають специфічним!

Калібру вальний графік і кількісна оцінка результатів

Показники оптичної щільності (ОЩ) калібраторів наносяться на графік навпроти показників активності. Рекомендуємо для побудови калібрувального графіка використовувати " сubicspline approximation".

Стандартна калібрувальна крива дозволяє визначити показники активності проб аспарагін ази відповідно до значеньїх оптичної щільності.

Показники, що вимірюються, знаходяться в інтервалі від 30 до 600 Од/л. Проби з показниками нижче рівня, що вимірюється, повинні бути інтерпретовані як такі, що мають значення активності< 30 Од/л. Проби з показниками вище рівня, що вимірюється, повинні бутиінтерпретовані як такі, що мають значення активності > 600 Од/л. Ці показники не повинні бути екстрапольовані, їх визначення слід повторити прибільш високому розведенні.

Якщо проба була виміряна при розведенні більшому, ніж 1:10, значення активності аспарагін ази, яке визначене за калібрувальною кривою, необхідно помножити на додатковий фактор розведення (наприклад: розведення проби 1:40, визначена концентрація 250 Од/л, реальна концентрація становитиме: 250 х 4 = 1000 Од/л).

6. В. Інтерпретація результатів / обмеження щодо використання методу.

• За допомогою medac тесту визначення активності аспарагін ази можливе вимірювання активності у сироватці всіх зареєстрованих комерційних препаратів аспарагін ази.

• Калібрування тесту здійснюєтьсяаспарагін азою medac, що дозволяє, застосовуючи тест-кіт, зчитувати точні кількісні значення активності аспарагін ази medac, використовуючи стандартну криву. У пацієнтів, терапія яких проводиться іншими комерційними препаратамиаспарагін ази, внаслідок специфічних відмінностей в активності результати вимірювань можуть відрізнятися.

• Сучасні наукові дані не дозволяють однозначно визначити межові значення активності аспарагін ази, які гарантують 100% руйнування аспарагіну, тому кожного разу межові значення повинні бути визначені відповідно до терапевтичних цілей кожного користувача або, відповідно, дослідницької групи. Робота, опублікована Riccardi et al(1981), вказує, однак, на те, що активність аспарагін ази > 100 Од/л забезпечує повне руйнування аспарагіну. -Високі концентрації гемоглобіну та білірубіну не впливають на результати.

7. Характеристики проведення тесту.

У процесі оцінки діагностичних можливостей були вивчені такі характеристики проведення тесту.

7. А. Фізіологічні значення активності аспарагін ази.

При оцінці діагностичних можливостей досліджувались 102 проби сироваток донорів. Виміряти активністьаспарагін ази у пробах виявилося неможливим. У всіх пробах активністьаспарагін ази була менше 30 Од/л. У доповнення до цього 52 проби сироваток дітейбули досліджені на активність аспарагін ази. Показники у цій популяції такожбули менше 30 Од/л.

7. В. Точність.

Проба

Варіації всередині аналізу

Проба

Варіації між аналізами

Меап ОD

SD

СV

(%)

п

Мean UL

SD

СV

(%)

п

Std.1

2,162

0,068

3,1

22

К

91,5

3,7

4,1

9

К

0,530

0,006

1,2

22

Nr.3

38,2

1,7

4,5

9

Nг. 1

0,254

0,006

2,5

22

Nr.4

125,5

7,5

6,0

9

Nr.2

1,380

0,021

1,5

22

Nr.5

420,3

33,7

8,0

9

Std= калібратор; К= контроль;Nr.= сироватка; OD= оптична щільність.

7. С. Відтворення

Середнє відтворення = 93,6%(SD=9,9%) було вирахувано при додаванні кожної з трьох проб з різною активністюаспарагін ази (аспарагін аза medac) до трьох серій наборів реагентів.

7. Р. Лінійність розведення.

Лінійність розведення була перевірена за допомогою 10 високо реактивних сироваток, які були тестовані у 4-5різних розведеннях (кожне наступне у співвідношенні 1:2 до попереднього).

Розв. 1 Од/л

Розв. 2 Од/л

Розв. 3 Од/л

Розв. 4 Од/л

Розв. 5 Од/л

mean Од/л

SD

Одл

СV,

%

Nr.1

1731

1789

1845

1897

------

1815

. 71

3,9

Nг.2

440

446

465

476

-----

457

17

3,6

Nг. З

1569

1638

1665

1672

------

1636

47

2,9

N.4

359

357

373

375

------

366

9

2,5

N.5

373

380

407

404

------

391

17

4,4

N. 6

543

520

546

564

614

557

35

6,3

N.7

940

945

972

979

------

959

19

2,0

N.8

8876

8889

9248

8986

9125

9025

160

1,8

N.9

3609

3775

4025

4273

-----

3920

291

7,4

N. 10

1087

1068

1116

1153

-----

1106

37

3,4

Розв. - розведення.

7. Е. Викривлення результатів.

Результати визначення активності аспарагін ази аж до значень 20000 Од/л не викривлюються.

7. Р. Межі кількісного аналізу (нижня межа вимірювання, LOG).

Нижня межа вимірювання дорівнює 30 Од/л. Загальні рекомендації до проведення аналізу.

• Для запобігання перехресної контамінації не плутайте пробірки та кришки, що їм відповідають.

• Відразу після використання реагенти повинні бути герметично закриті з метою запобігання випаровування та мікробної контамінації.

• Після використання реагенти повинні бути негайно розміщені для зберігання згідно з інструкцією, що гарантує їх збереження протягом терміну придатності.

• Після використання всі компоненти тест-набору повинні зберігатися в оригінальній упаковці для запобігання змішування з реагентами інших тест-систем або наборів (див. 3).

Інформація про правила безпеки.

• Необхідно дотримуватися правил виробничої техніки безпеки у межах затверджених національних норм.

• Реагенти, які виготовлені з біологічних рідин людини, тестовані з негативним результатом на наявністьНbsAs, АТ до ВІЛ 1 і 2 типу та НСV. Незважаючи на це, настійно рекомендується при роботі з цими матеріалами, як і з матеріалами тваринного походження (див. вміст набору), вважати їх потенційно контагіозними та використовувати всі необхідні застережні заходи.

• R 36/38: подразнює очі ташкіру.

S 26: при потраплянні в око відразу промити його великою кількістю води та звернутися за медичною допомогою.

Обговорення проблеми видалення залишків.

Залишки хімічних речовин і препаратів є, як правило, небезпечними відходами. Видалення такого роду відходів регулюється національними та регіональними законами. Проконсультуйтеся з місцевими відомствами та компаніями з видалення небезпечних відходів з метою одержання рекомендацій щодо їх знищення.

Умови та термін зберігання. ЗБЕРІГАТИ В НЕДОСТУПНОМУ ДЛЯ ДІТЕЙ МІСЦІ. Зберігати при температурі 2-8°С у захищеному від світла місці.

Термін зберігання. 1 рік.